A utilização de Saccharomyces cerevisiae para a caracterização funcional da proteína SmRho1 de Schistoma mansoni
AUTOR(ES)
Francisco Pereira Lobo
DATA DE PUBLICAÇÃO
2005
RESUMO
A esquistossomose é atualmente a segunda doença tropical mais prevalente na espécie humana, sendo causada por parasitas do gênero Schistosoma. Nas Américas, o maior agente etiológico dessa patologia é o Schistosoma mansoni. Dada a grande importância médica desse parasita, diversos projetos Genoma tem sido realizados visando conhecer a biologia do mesmo e solucionar algumas dúvidas sobre diversos aspectos da sua relação com o hospedeiro vertebrado. Em um desses projetos um cDNA homólogo à GTPase de baixo peso molecular Rho, que participa de diversos eventos de polarização celular em todos os eucariotos, foi isolado e caracterizado por complementação funcional em leveduras. Nessa caracterização foi verificado que o mesmo apresentava uma complementação muito mais abrangente do que o seu homólogo humano, sendo inclusive capaz de complementar a levedura em condições restritivas de estresse osmótico. Através da comparação das seqüências do gene de S. mansoni com seu homólogo de Saccharomyces cerevisiae e com HsRhoA humana 3 seqüências de SmRho1 mutantes (E97P, L101T e E97P/L101T) foram construídas com mutações nas posições mais discrepantes entre HsRhoA e as outras duas Rho, visando elucidar mais sobre o mecanismo de complementação de SmRho1. Dois dos mutantes construídos (E97P, e E97P/L101T) apresentaram uma complementação parcial comparável à HsRhoA, indicando assim que possivelmente o resíduo de ácido glutâmico 97 é crítico para a complementação diferencial entre SmRho1 e HsRhoA. Neste trabalho a caracterização de SmRho1 e seus mutantes continuou através da verificação de ensaios de complementação funcional com as Rho supracitadas na presença de cafeína, que é um inibidor da via de PKC, da qual ScRho1 participa e através da procura de possíveis interações diferenciais entre SmRho1 e seus mutantes, ScRho1 e HsRhoA com domínios de proteínas que sabidamente interagem com ScRho1 em S. cerevisiae pela técnica do duplo híbrido. Os ensaios de complementação demonstram que SmRho1 é bem menos eficiente que seu homólogo de levedura na presença de PKC e sugerem que os mutantes E97P e E97P/L101T possuem ainda mais restrições do que seu selvagem na complementação. Os ensaios de duplo-híbrido não foram capazes de detectar nenhuma interação, possivelmente por termos trabalhado com domínios ao invés das ORFs completas.
ASSUNTO(S)
bioquímica teses. saccharomyces cerevisiae teses. esquistossomose mansônica teses.
ACESSO AO ARTIGO
http://hdl.handle.net/1843/UCSD-87RHQPDocumentos Relacionados
- Caracterização funcional da proteína SmRbx: um aproteína de Schistosoma mansoni similar à proteína RING box envolvida no processo de Ubiquitinação
- Caracterização molecular e imunológica da proteína de membrana Sm29 do Schistosoma mansoni.
- Caracterização funcional da proteína Nop8p de Saccharomyces cerevisiae
- Caracterização estrutural e funcional das glutarredoxinas ditiolicas de Saccharomyces cerevisiae
- Caracterização funcional da proteína Coq10p de Saccharomyces cerevisiae na atividade respiratória da coenzima Q.