Analise do comportamento de celulas vero em geis de colageno tipo I utilizando a tecnica de cultivo em sanduiche

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2000

RESUMO

As células Vero, uma linhagem estabelecida a partir de células renais de macaco verde africano (Cercopithecus aethiops), foram mantidas utilizando a técnica de cultivo em sanduíche. Dois tipos de sanduíche foram utilizados vidro/colágeno e colágeno/colágeno, com 10% e 20% de soro feta! bovino (SFB), com o objetivo de se verificar o comportamento das células Vero neste método de cultivo. As células foram avaliadas quanto a morfologia utilizando-se a coloração com hematoxilina-eosina (HE), citoquimicamente por meio de azul de toluidina pH 4,0 (A T) e xylidine Ponceau pH 2,5 (XP), e imunocitoquimicamente com anticorpos anti-colágeno IV e anti-Iaminina. As células cultivadas durante um período de 7 dias, no sanduíche vidro-colágeno com 10% e 20% de SFB cresceram em ambos os substratos. As células que permaneceram sobre o vidro apresentaram morfologia variada com predomínio de células alongadas, sendo que em vários locais as lamínulas não apresentavam células mostrando que as mesmas foram capazes de migrar contra a força da gravidade em direção à matriz colagênica. Essas células que migraram para o colágeno I apresentaram formato alongado ou arredondado, sendo que este último predominou quando houve infiltração para o interior do gel colagênico. Observou-se também a contração do mesmo, ou seja, a redução do tamanho e a formação de dobras no gel de colágeno. Nas regiões onde as células não infiltraram, estas cresceram formando uma lâmina basal. No cultivo com a técnica de sanduíche colágeno/colágeno as células aderiram, proliferaram e infiltraram no colágeno existente abaixo e sobre as células, apresentando alterações na forma celular, caracterizando um processo de diferenciação induzido pelo substrato. O colágeno apresentou contração nas duas camadas do sanduíche. Nas regiões em que não houve infiltração das células Vero para o interior do gel, houve a formação de um tecido com características semelhantes as de um epitélio, com produção de uma lâmina basal, sendo este resultado igual ao observado no sanduíche vidro/colágeno. Na análise cito química, as células Vero, em ambos os sanduíches, quando coradas com A T mostraram núcleos, nucléolos e citoplasma basófilos e em algumas regiões evidenciou-se grânulos basófilos no meio extracelular. Quando as amostras foram coradas com XP , as células Vero apresentaram intensa coloração vermelho-alaranjado, onde pôde ser visualizada uma região acelular mais intensamente corada, entre as células e o colágeno, representando uma lâmina basal, que em algumas regiões era evidente e em outras não. Nesta região, os resultados imunocitoquímicos confirmaram a presença de uma membrana basal rica em colágeno IV e laminina. Tendo por base estes resultados, conclui-se que as células Vero apresentam comportamento similar quando cultivados sobre o colágeno ou quando cultivadas pela técnica de sanduíche. As células em contato com o colágeno diferenciaram-se e passaram a exibir características de um tecido epitelial, inclusive com a formação de uma lâmina basal, ou se infiltraram para o interior do gel colagênico. O comportamento celular é similar quando se usa 10% ou 20% de SFB no meio de cultivo, sendo que neste último caso, a formação de uma membrana basal foi mais evidente e ocorreu menor infiltração das células para o interior do gel

ASSUNTO(S)

colageno celulas - cultura e meio de cultura

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