Anticorpos policlonais contra a proteína capsídica de Apple stem grooving virus expressada em Escherichia coli: produção e uso em imunodiagnose

AUTOR(ES)

Nickel, Osmar, Targon, Maria L.P.N., Fajardo, Thor V.M., Machado, Marcos A., Trivilin, Ana P.

FONTE

Fitopatologia Brasileira

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004-10

RESUMO

O gene da capa protéica de Apple stem grooving virus (ASGV) foi amplificado por RT-PCR, clonado, seqüenciado e subclonado no plasmídeo pMal-c2. A capa protéica de ASGV foi expressa em Escherichia coli como proteína de fusão contendo um fragmento do gene da proteína de ligação a maltose de E. coli (MBP). Células bacterianas foram rompidas por sonicação e a proteína de fusão ASGVcp/MBP foi purificada por cromatografia de afinidade em resina de amilose. Anti-soros policlonais de coelhos imunizados com a proteína de fusão reagiram especificamente com extratos de maçãs (Malus domestica) cv. Fuji Irradiada e Chenopodium quinoa infetadas com ASGV em diluições de 1:1000 e 1:2000, respectivamente, em ELISA indireto. A proteína de fusão ASGVcp/MBP reagiu positivamente com anticorpos comerciais produzidos contra ASGV em testes de "immunoblotting". A imunogamaglobulina contra ASGVcp/MBP teve desempenho favorável em especificidade e sensibilidade ao vírus. Este método representa um instrumento adicional para a eficiente indexagem de ASGV em material propagativo e básico de maçã e como complemento de métodos biológicos e moleculares.

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