Aplicação de triagem de alto desempenho na investigação das atividades enzimaticas e enantiosseletividades de microorganismos brasileiros / Enzymatic activities and Quick E in hydrolases screening appyng fluorescent probes

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Nas últimas décadas as reações utilizando biocatalisadores tem sido amplamante aplicadas na síntese orgânica, como componentes chave de muitos processos químicos industriais, levando ao aumento na demanda por novas enzimas. A maneira mais rápida e simples de detectar enzimas é através de metodologias de triagem de alto desempenho (HTS) que permitam identificação rápida da atividade enzimática, como por exemplo, os ensaios utilizando compostos fluorogênicos e cromogênicos. Nesse trabalho nós aplicamos HTS baseado em substratos fluorogênicos para detecção de epóxido-hidrolases e esterases em microrganismos brasileiros. Inicialmente foram selecionados cinco microrganismos com alta atividade epóxido-hidrolase, e 18 pela a presença de esterases. Inspirados nesse principio nós adaptamos a metodolgia conhecida como "Quick E" para a avaliação rápida das enantiosseletividades de epóxido-hidrolases em células íntegras através de medidas das velocidades iniciais de substratos fluorogênicos quirais avaliados separadamente com adição de um competidor. Os ensaios de enantiosseletividade mostraram que os experimentos com competidor apresentaram valores de enatiosseletividade muito próximos dos valores de E determinados via biocatálise convencional. Além disso, alguns microrganismos selecionados por HTS foram testados para reações de biotransformação frente a substratos de interesse sintético, o que permitiu, além da confirmação das atividades enzimáticas e seletividades observadas, detectar a capacidade do microrganismo C. albícans CCT 0776 de desracemizar álcoois secundários por estereoinversão, fornecendo o (S)-1,2-octanodiol com 100 % de rendimento teórico e ee >99 %, e o (S)-4-fenilmetoxi-1,2-butanodiol com ee 45 %

ASSUNTO(S)

stereoinversion estereoinversão epoxide hidrolases enantioselectivity esterases enantiosseletividade high-throughput screening

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