Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli

AUTOR(ES)

Wulff, Nelson Arno, Carrer, Helaine, Pascholati, Sérgio Florentino

FONTE

Scientia Agricola

DATA DE PUBLICAÇÃO

2003-12

RESUMO

Xylella fastidiosa foi a primeira bactéria fitopatogênica que teve seu genoma completamente seqüenciado. A identificação de diversos genes, através de similaridade de seqüências, indicou os possíveis mecanismos de patogenicidade da bactéria. Entretanto, a determinação da função de um gene requer a confirmação experimental e, neste aspecto, a expressão heteróloga é uma poderosa ferramenta. X. fastidiosa coloniza somente o xilema das plantas hospedeiras e a identificação putativa de diversos genes semelhantes a enzimas que degradam a parede celular vegetal, estimularam o presente estudo de catacterização destas enzimas. A clonagem da ORF Xf-818 de X. fastidiosa no vetor de expressão pET20b possibilitou a produção da proteína heterologamente em E. coli. O emprego de IPTG a 0,4 mmol L-1 com 12 h a 32°C, possibilitou as melhores condições para E. coli produzir a proteína heteróloga. Clones de E. coli que expressam Xf-818, apresentam atividade celulásica, degradando eficientemente a celulose. A identificação de Xf-818 como uma endoglicanase foi assim confirmada.

ASSUNTO(S)

clorose variegada dos citros celulases clonagem e expressão

Documentos Relacionados

• Caracterização enzimática das celulases XF-810, XF-818 e XF-2708 de Xylella fastidiosa e purificação da proteína XF-818, expressas em Escherichia coli.
• Role of the Xf-0818 cellulase in the Xylella fastidiosa X citrus interaction.
• Structural and functional studies of two glycosyl hydrolases : the putaitve cellulase XF0810 of Xylella fastidiosa and the digestive lysozyme 1 of Musca domestica
• Functional and structural analysis of the BigR protein from Xylella fastidiosa involved in the regulation of Xf0768-0764 operon
• Clonagem e expressão da capa protéica de geminivírus de tomateiro em Escherichia coli para estudos sorológicos.