Detecção de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli em sementes de feijão usando citometria de fluxo em combinação com anticorpo e sondas fluorescentes de viabilidade
AUTOR(ES)
Tebaldi, Nilvanira D, Peters, Jeroen, Souza, Ricardo M, Chitarra, Luiz G, van der Zouwen, Patricia, Bergervoet, Jan, van der Wolf, Jan
FONTE
Tropical Plant Pathology
DATA DE PUBLICAÇÃO
2010-08
RESUMO
A combinação do uso do citômetro de fluxo (FCM) e de anticorpo policlonal (imuno-FCM) foi comparada à microscopia de imunofluorescência (IF) e ao plaqueamento em meio de cultura semi-seletivo, para a detecção de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap) em sementes de feijão. Concentrações de Xap variando de 10³ a 10(7) CFU/mL foram adicionados aos extratos de sementes. Um método de separação pelo citômetro de fluxo foi desenvolvido para a detecção de Xap em extratos de semente e posterior confirmação por PCR. Para avaliação da viabilidade das células foram usadas sondas fluorescentes, iodeto de propídio (PI)/carboxi diacetato de fluoresceína (cFDA) e PI/SYTO 9 e também, a combinação de imuno-FCM e PI. Em meio semi-seletivo e IF foram detectadas 10³-10(6) UFC/mL e no FCM 10(4)-10(6) UFC/mL, em extratos de sementes artificialmente infestados. Xap somente foi detectada em extratos de sementes por PCR, após o processo de separação pelo FCM. Foi possível pelo FCM a quantificação e identificação de células viáveis (verde fluorescente) e células mortas (vermelho fluorescente) de Xap, pelas sondas cFDA/SYTO 9 e PI, respectivamente. A combinação de immuno-FCM e PI poderá ser uma técnica promissora e segura para a detecção deste patógeno em sementes.
ASSUNTO(S)
patologia de sementes pcr sondas de viabilidade imuno-fluorescência bactéria
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