EFFECT OF THE ADDITION OF TRYPTOPHAN TO CALLUS CULTURES OF Passiflora Alata CURTIS / EFEITO DA ADIÇÃO DE TRIPTOFANO EM CALOS DE Passiflora alata CURTIS

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

O gênero Passiflora compreende várias espécies que se destacam por sua importância econômica na agricultura e para fins medicinais, por apresentarem propriedades sedativas e ansiolíticas reconhecidas. No entanto, ainda há poucos estudos fitoquímicos disponíveis para confirmar quais constituintes químicos estariam envolvidos nos efeitos farmacológicos observados. Entre os fitoconstituintes já descritos, os flavonóides C- glicosilados e alcalóides b- arbolínicos representam os grupos de maior interesse farmacologico, já que a sua caracterização por cromatografia de camada delgada é especificada nos ensaios farmacopeicos de identidade para P. alata, que é a espécie oficial no Brasil. P. alata é a mais utilizada na medicina popular, mas estudos recentes, utilizando técnicas cromatográficas avançadas, não detectaram a presença de alcalóides. Por essa razão, o presente trabalho teve como objetivo, desenvolver metodologia analítica por Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para análise de alcalóides b-carbolínicos em cultura celular vegetal de P. alata, já que esta técnica de cultivo vem sendo cada vez mais utilizada devido à possibilidade de investigação de vias metabólicas em plantas, sob condições controladas. Para tanto foi desenvolvido método analítico por CLAE onde a fase móvel utilizada consistiu em metanol e tampão acetato de sódio 50 mM com pH ajustado para 4,0 com ácido acético glacial, em sistema gradiente de concentração de 30 a 55% de metanol na solução tampão em 20 min e até 100% metanol em 5 min, e mantidos mais 5 min, em 10 min é reestabelecido o gradiente inicial. As amostras analisadas foram obtidas por extração ácido-base, a partir de calos de P. alata, cultivados em meio de cultura MS modificado, com e sem o aminoácido L-triptofano (50, 100 e 200 mg/L) como precursor dos alcalóides de interesse. Os resultados obtidos nas análises por CLAE através de detector de arranjos de fotodiodos mostraram a presença de duas substâncias, denominadas A e B, que apresentaram tempo de retenção e perfil de absorção no ultravioleta (UV) diferentes dos padrões de alcalóides b-carbolínicos utilizados (harmana, harmina, harmalina, harmalol e harmol). Para identificação das substâncias detectadas, foram feitas análises de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) e Espectroscopia de massas (EM). Os resultados obtidos nestas análises confirmaram que as substâncias A e B, que apresentaram nas suas estruturas químicas o anel heterocíclico denominado pirazol, foram formadas, a partir do triptofano, durante o processo de obtenção das amostras e não por via enzimática, já que o anel indólico não se manteve intacto. Dessa forma, podemos concluir que, o método analítico por CLAE desenvolvido para análise dos alcalóides b-carbolínicos mostrou resultados satisfatórios, apresentando picos simétricos e com boa resolução nas análises dos padrões utilizados e que nas condições de cultura celular vegetal de P. alata estabelecidas não ocorreu a produção dos alcalóides já descritos para o gênero.

ASSUNTO(S)

farmacia cultura de células vegetais passiflora alata cromatografia líquida de alta eficiência (clae) high performance liquid chromatography (hplc) alcalóides indólicos passifloraceae passifloraceae produtos naturais indolic alkaloids plant cell culture passiflora alata

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