Effects of low-level laser therapy (685 and 830 nm) in bacterial growth and wound healing in animal models / Efeitos da terapia a laser de baixa intensidade (685 e 830 nm) na taxa de proliferação bacteriana e na cicatrização de feridas cutâneas em modelo animal

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Recursos fisioterapêuticos tem sido utilizados no tratamento de úlceras de perna como a terapia a laser de baixa intensidade. A contaminação bacteriana dessas úlceras é freqüente constituindo-se numa importante complicação da cicatrização. Assim, busca-se investigar os efeitos dessa terapêutica frente às culturas de diferentes espécies bacterianas in vitro e in vivo. Utilizou-se aparelho laser modelo Theralase III-DMC (685 e 830 nm) e diferentes doses (1,2 e 4J). Foram utilizados bactérias, S. aureus ATCC 6538 (Gram+) e P. aeruginosa ATCC 15442 (Gram-), reativadas em B.H.I.Agar inclinado a 37 graus C/24h. Após as bactérias foram re-suspensas em B.H.I. caldo/37 graus Celsius/20h, centrifugadas 3x/15min/4.500rpm, seguida de lavagens e homogeneização. A suspensão foi diluída em placas de cultura celular de 96 poços, submetidas a diluições seriadas sucessivas, encontrando as diluições ideais de 10 POT.-12bactérias/ml para S. aureus e 10 POT.-15bactérias/ml para P. aeruginosa. As soluções bacterianas foram irradiadas com laser de diferentes comprimentos de onda (685 e 830 nm) e diferentes doses (1, 2 e 4J). Dez micro litros da solução bacteriana do último poço foram semeados em placa de petri nos meios Mc Conkey Agar e B.H.I.-Agar bactérias Gram positiva e negativa respectivamente para posterior contagem das unidades formadoras de colônia (U.F.C.´s.). Foram semeadas 10 placas para cada dose de diferente comprimento de onda e espécie bacteriana diferente e 10 placas para o grupo controle, ou seja, sem irradiação laser. Nos estudos in vivo, foram utilizados coelhos, machos, neozelandeses pesando aproximadamente 1,5 Kg. A anestesia foi feita com 1,5 ml/animal de ketamina 100 mg e xylzina 1,0 ml/animal. Foram feitas 6 feridas de 6 mm de diâmentro (punch) em cada orelha, constituindo-se cada animal, um grupo (n=12). As feridas foram previamente contaminadas com S. aureus (G+) e P. aeruginosa (G-). Os animais foram divididos em Grupo 1 (laser 685 nm + G+), Grupo 2 (laser 830 nm + G+), Grupo 3 (laser 685 nm + G-), Grupo 4 (laser 830 nm + G-), Grupo 5 (apenas laser 685 nm), Grupo 6 (apenas laser 830 nm), Grupo 7 (lasers 685 e 830 nm + G-), Grupo 8 (lasers 685 e 830 nm + G+). As úlceras foram fotografadas nos tempos de 24h, 3 dias, 7 dias, 10 dias, 13 dias e 16 dias e posteriormente analisadas com programa Image J, realizadas pelo mesmo indivíduo. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico ANOVA e pós-teste de Bonferroni para múltiplas amostras não paramétricas. No experimento in vitro foi observado que todas as doses laser utilizadas tiveram efeito inibitório no crescimento bacteriano em ambas as espécies, sendo esse efeito maior na dose de 4 J/CM POT.2, nos diferentes comprimentos de onda utilizados (685 nm e 830 nm), mesmo quando esses foram usados de forma consecutiva. In vivo, observou-se que no 3º dia pós cirúrgico houve uma diferença estatisticamente significante entre os grupos 1 e 6. No 7º dia a diferença estatística aconteceu entre os grupos 1 e 4. No 10º dia, não houve diferenças estatisticamente significante entre as áreas dos grupos. No 13º dia observou-se diferença estatística entre todos os grupos quando comparados com os grupos 7 e 8 (lasers 685 e 830 nm + G+). No 16º de segmento todas as feridas encontavam-se cicatrizadas. A terapia a laser de baixa intensidade apresentou efeito inibitório do crescimento bacteriano in vitro e nos estudos in vivo, mostrando-se capaz de acelerar o processo de cicatrização de feridas, mesmo contaminadas com diferentes espécies bacterianas.

ASSUNTO(S)

Úlceras de perna wound healing crescimento bacteriano cicatrização leg ulcers low-level laser therapy terapia a laser de baixa intensidade bacterial growth models animal modelo animal

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