Esterases e resistência a acaricidas no carrapato bovino Boophilus microplus (Acari, Ixodidae)

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

O carrapato bovino Boophilus microplus é um dos ectoparasitos mais importantes para a agropecuária brasileira, sendo responsável, segundo o Ministério da Agricultura, por prejuízos diretos e indiretos à bovinocultura de, aproximadamente, dois bilhões de dólares ao ano. O método tradicional de controle baseia-se no uso de acaricidas piretróides e organofosforados, cujo uso sistemático tem promovido a seleção de genótipos resistentes em populações de carrapatos. Mutações de ponto em genes codificadores de esterases e o aumento na produção dessas enzimas representam importantes estratégias de resistência, conferindo insensibilidade ao efeito neurotóxico desses compostos orgânicos nessa espécie. Neste trabalho, realizou-se a análise do padrão de esterases nas diferentes fases do ciclo de vida do carrapato, por eletroforese em gel de poliacrilamida nativo e coloração específica para esterases. Os resultados mostraram nove regiões com atividade esterásica, consideradas como produtos de nove alelos distribuídos em sete loci genéticos. Esterases detectadas em todas as fases do desenvolvimento foram consideradas como produtos de genes housekeeping. Esterases estágioespecíficas e sexo-específicas foram, também, detectadas. Linhagens com diferentes níveis de resistência foram selecionadas após o teste de resistência com o organofosforado malation e o piretróide deltametrina em teleóginas provenientes de uma fazenda da região de Uberlândia, MG, com histórico de resistência. A análise do padrão de esterases por eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante das linhagens sensível (SM), tolerante (TM) e resistente (RM) ao malation e das linhagens sensível (SD), tolerante (TD) e resistente (RD) a deltametrina revelou a presença de quatro regiões com atividade esterásica (EST-1 a EST-4). As enzimas EST-3 e EST-4, classificadas como carboxilesterases (CaEs), foram observadas em todas as linhagens. A EST- 2, classificada como acetilcolinesterase (AChE), foi detectada em todas as linhagens, porém, apresentou intensidade crescente de atividade esterásica, indicando aumento na produção da enzima de acordo com o nível de resistência, provavelmente resultante de amplificação gênica ou alterações pós-traducionais. A EST-1, classificada como AChE, foi detectada exclusivamente nas linhagens tolerantes e resistentes a ambos acaricidas, com maior atividade nas linhagens xvi resistentes (RD e RM). Os resultados indicam que as AChEs detectadas representam importante estratégia de detoxificação aos acaricidas. Essas linhagens foram, também, analisadas pelas técnicas Low Ionic Strength Single Stranded Conformation Polymorphism (LIS-SSCP) e Polimerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) para investigação de mutações em uma provável CaE. A digestão do fragmento amplificado de 372pb com enzima de restrição Eco RI por PCR-RFLP mostrou três padrões de bandas associados a três genótipos distintos, W, H e M, observados em diferentes freqüências nas linhagens analisadas. O genótipo homozigoto selvagem (W) foi detectado exclusivamente nas linhagens sensíveis (SD e SM) e em alta freqüência. O genótipo heterozigoto (H) foi detectado em todas as linhagens, porém, em maior freqüência nas linhagens tolerantes (TD e TM) e, o genótipo homozigoto mutante (M) foi observado nas linhagens tolerantes e resistentes, em maior freqüência nas linhagens resistentes (RD e RM), sugerindo que a resistência esteja associada à presença do alelo mutante m (polimorfismo EcoRI). A genotipagem por LIS-SSCP mostrou quatro haplótipos: 1 2, 3 e 4. O haplótipo 1 foi observado apenas nas linhagens sensíveis (SD e SM) e em alta freqüência. O haplótipo 4 foi observado nas linhagens tolerantes e resistentes, com a maior freqüência nas linhagens tolerantes (TD e TM). O haplótipo 3, foi observado nas linhagens tolerantes e resistentes, sendo detectado em maior freqüência nas linhagens resistentes (RD e RM). O haplótipo 2 foi detectado nas linhagens tolerantes e resistentes, porém, em freqüência muito baixa. A comparação entre as seqüências revelou a presença de mutações de ponto, além do polimorfismo EcoRI nas linhagens tolerante e resistente ao malation. Foi observada, também, a presença de códons de parada, gerando proteínas truncadas, nas linhagens sensível e tolerante. A análise de domínios mostrou a presença de domínios adicionais na linhagem resistente. Os dados obtidos sugerem a existência de mecanismos mediados por mutações de ponto, amplificação gênica e modificações pós-traducionais, que podem estar alterando a atividade das proteínas traduzidas e atuando em conjunto na expressão da resistência na população analisada.

ASSUNTO(S)

acaricidas genetica resistance resistência esterases acaricides boophilus microplus carrapato bovino

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