Estudo da produção da enzima invertase extracelular por Kluyveromyces bulgarius

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

1992

RESUMO

O principal objetivo deste trabalho, foi estudar a produção da enzima invertase por Kluyveromyces bulgaricus utilizando diferentes processos de fermentação com células livres e imobilizadas. Estudou-se igualmente a influência dos substratos sacarose, glicose e frutose na cinética de crescimento do microrganismo e de produção da enzima, além de procurar caracteriza-la cineticamente. As fermentações foram realizadas á temperatura de 30°G e aeração entre 0,2 a 0,3 vvm, sendo que dos processos estudados, os melhores resultados foram obtidos- para reator contínuo com células imobilizadas, com volume liquido de 530 ml, utilizando melaço como fonte de carbono e agua de maceração de milho como fonte de nitrogênio. Os valores de atividade enzimática, produtividade e rendimento para os diferentes processos foram: para o processo batelada simples respectivamente 9,17 U.I/ml, 0,19 U.I/ml.h e 424,34 U.I/g ART; para processo batelada alimentada 11,0 U l/mi, 1,3 U.I/ml.h e 883,66 Ul/g ART; para processo em reator contínuo duplo estágio 32,0 U.I/ml, S,30 U.I/ml.h e 1749,60 U.I/g ART e para reator contínuo com células imobilizadas 97,3 U.I/ml , 5,74 U.I/ml.h e 5322,97 U.I/g AKT. Para o estudo da influência do substrato na produção da enzima, verificou-se tratar-se de enzima constitutiva e que a produção é inibida pela presença em excesso de sacarose, glicose e frutose. Através da técnica de perturbação por degrau, em fermentação contínua determinou-se µmax constante de saturação Ks para o microrganismo. As constantes cinéticas de crescimento µmax (velocidade específica de crescimento máxima) e Ks ( constante de saturação ) foram deter terminadas em fermentação contínua. Verificou-se que para qualquer dos substratos utilizados (sacarose, glicose e frutose) µmax foi aproximadamente constante e igual a 0,24 h-1, enquanto que Ks foi 1,4*10-4, 1,15*10-3 e si 1,77*10-3 mol/l, respectivamente para sacarose, glicose e frutose. Os valores das constantes cinéticas µmax e Ks para a produção da enzima nos diferentes substratos foram: 3099,51 U.I/gcel . h e 0,0181 mol/l; 5264,8 U.I/g h e 0,0023 mol/l e 14S0.99 U.I/g . h e 0.0097 mol/l para a sacarose, glicose e frutose respectivamente. Quanto a caracterização da enzima foram encontrados os valores da energia de desativação para a enzima precipitada com álcool e após passsagem por coluna de DEAE- celulose, 61043 cal/g.mol e 93861,9 cal/g.mol respectivamente. Para a enzima bruta (após precipitação com álcool) foram encontrados os valores de Km igual 0,0662 mol/l e Vmax igual a 2037 U.I/ml.

ASSUNTO(S)

enzimas enzimas - analise

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