Estudos de matrizes e inibidores nas reações catalisadas por DNA polimerases dependentes de RNA

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DATA DE PUBLICAÇÃO

1985

RESUMO

Este trabalho contem alguns estudos fisico-quimicos de DNA polimerases dependentes, de RNA. Poliaminas, em presença de Mg2+, exercem um efeito ativador nas reações catalisadas por transcripta-se reversa de virus de mieloblastose de aves, mas não por DNA polimerase a de Xenopus laevis. Derivados de nucleotídeos e polinucleotídeos foram descritos como substratos e inibidores de transcriptase reversa. dCflTP pode ser incorporado parcialmente no DNA sintetisadqo por transcriptase reversa e por DNA polimerases celulares a e ?. Análogos de poli A e poli C, com substituintes 2 -fluor e 2 -O-metil, podem ser utilizados como matrizes de síntese de DNA catalisada por transcriptase reversa, em presença de Mg2+ ou Mn2+. O papel do Mn2+ na síntese de DNA e discutido neste trabalho. Diferentes compostos foram utilizados como inibidores de sintese de DNA. O antibiótico novobiocina diminui a formação do complexo entre Trp transcriptase reversa e o tRNA iniciador, ligando-se irreversivelmente à enzima. (dCfl)n é um inibidor de transcriptase reversa utilizando-se DNA ativado ou RNA 70 S como matrizes naturais e (dA)n ou (rA)n como matrizes sintéticas. Nas mesmas condições nenhum efeito é verificado nas reações catalisadas por DNA polimerase a . As reações de transcriptase reversa em presença de (dAfl)n.(dT)12 como matriz-iniciador são resistentes à ação de (dCfl)n e de outros polinucleotídeos inibidores como (rU)n e (rI)n. Entretanto, tais reações são inibidas por outros compostos como brometo de etideo, tetrametil brometo de etídeo, berenil e N-etilmaleiimida. DNA polimerase A de gérmen de trigo apresenta características de uma DNA polimerase dependente de RNA. Como a transcriptase reversa, a DNA polimerase A reconhece (rA)n com uma eficiência maior em presença de Mg2+, e é inibida por glicerol e actinomicina D. O reconhecimento de matrizes naturais do tipo RNA somente se verifica utilizando-se desoxinucleosídeos trifosfato de alta atividade específica. O processo do reverso da transcrição pode ser observado também em virus de DNA. DNA polimerases purificadas de folhas infectadas pelo vírus do mosaico da couve-flor reconhecera com eficiência (rA)n, (rC)n, (Cm)n como matrizes sintéticas; são resistentes à ação de afidicolina e são inibidas por brometo de etídeo

ASSUNTO(S)

reação em cadeia de polimerase dna polimerases

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