Expressão de antígeno multiepítopo do Dengue virus em planta utilizando vetor de PVX

AUTOR(ES)

Franciele Roberta Maldaner

DATA DE PUBLICAÇÃO

2009

RESUMO

Nos últimos anos as infeções pelo Dengue virus (DENV) têm emergido como um grande problema de saúde pública, com expansão da distribui-lo geográfica e aumento da atividade epidêmica em regiões tropicais e subtropicais da Ásia, África, Américas Central e do Sul. O diagnóstico da dengue tem sido realizado principalmente.por técnicas sorológicas, que permitem detectá-lo de anticorpos IgM e IgG, entretanto essas técnicas exigem o antígeno do DENV. A expressão de antígenos em plantas permite produzi-lo em larga escala, livre de patógenos animais e de baixo custo. Esse estudo objetivou a construí-lo de dois genes recombinantes multiepitopo que abrangeram os quatro sorotipos do DENV e expressão em plantas com o uso de vetor de PVX. Os genes multiepitopo foram construídos segundo dados de regiões antigênicas da proteína E descritos.na literatura, englobam os quatro sorotipos do DENV que estão fusionados em tandem por linkers de glicina na ordem 4, 3, 2 e 1. Os genes multiepitopo foram clonados no vetor de PVX pGR-2AH. Este foi modificado de forma a conter cauda de hexahistidina na região 5do gene multiepitopo seguido por sequência codificante do polipeptideo auto catal.tico 2A fusionados a capa prot.ica do PVX. O polipeptideo 2A exerce a autoclivagem C-terminal liberando os pept.deos multiepitopo livres da capa prot.ica e associados a cauda de hexahistidina. Foram construídos plasmídeos, um contam gene multiepitopo do domínio III, o outro pertence aos domínios I e II. Os clones foram agroinfiltrados em plantas de N. bentamiana e D.stramonium. Constatou-se que houve recuperação e replicação viral, entretanto com exceção de um clone o que abange os domínios I e II, os outros dois clones sofreram deleção dos genes multiepitopo do genoma viral, provavelmente pelo mecanismo de Criptic intron. A expressão do dom.nio I/II em D.stramonium foi confirmado com Western blottingm forma clivada da capa protéica do PVX.

ASSUNTO(S)

denv pvx vector e-di/ii clone gene multiepitopo clone e-diii (1) vetor de pvx, pgr-2ah virologia molecular pgr-2ah denv multiepitope gene e-diii clone biotecnologia clone e-di/ii (1) virologia

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