ExpressÃo de proteÃnas nÃo estruturais do vÃrus do Dengue e busca de genes candidatos A supressÃo de RNA interferente

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

O genoma do vÃrus do Dengue à constituÃdo de uma fita simples positiva de RNA, capaz de codificar sete proteÃnas nÃo-estruturais que assumem papel importante na replicaÃÃo, transmissÃo por mosquito, carÃter de virulÃncia e outras funÃÃes essenciais à manutenÃÃo do vÃrus dentro do hospedeiro. Devido a funÃÃes conhecidas, essas proteÃnas sÃo alvos para o desenvolvimento de controle do vÃrus e com a descoberta do envolvimento de proteÃnas nÃo estruturais na supressÃo do silenciamento de genes, tornou-se ainda mais interessante o estudo de suas funÃÃes. Nesse trabalho, a atividade supressora desse mecanismo nas sete proteÃnas nÃo estruturais do Dengue foi verificada, utilizando o sistema de Agrobacterium tumefaciens transient assay (ATTA) em Nicotiana benthamiana. O silenciamento gÃnico na planta foi confirmado atravÃs do baixo nÃvel de expressÃo de âGreen Fluorescent proteinâ, comparando com o controle inoculado com a proteÃna supressora HcPro de potyvirus, que apÃs o perÃodo de seis dias pÃs inoculaÃÃo foi capaz de resgatar a fluorescÃncia de GFP. Nenhuma das proteÃnas nÃo estruturais do Dengue apresentou capacidade de resgatar a fluorescÃncia de GFP nas folhas, o que parece indicar ausÃncia de atividade supressora de interferÃncia de RNA identificada pelo sistema utilizado (ATTA). Paralelamente aos testes realizados com as proteÃnas nÃo estruturais foi realizada a expressÃo da proteÃna NS2A em sistema procariÃtico, resultando nos primeiros indÃcios de detecÃÃo da mesma atravÃs de ensaio imunolÃgico a partir de proteÃnas totais de Escherichia coli extraÃdas apÃs diferentes tempos de induÃÃo.

ASSUNTO(S)

vÃrus rna genoma dengue genetica

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