Expressão do RNAm do kit ligand (KL), proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15) e fator de crescimento epidermal (EGF) e efeito das respectivas proteínas sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos. / MRNA expression of kit ligand (KL), bone morphogenetic protein 15 (BMP 15) and epidermal growth factor (EGF) and their effect on the protein in vitro development of caprine preantral follicles.

Juliana Jales de Hollanda Celestino

Os objetivos deste estudo foram: 1) quantificar os níveis de RNAm para o kit ligand (KL), proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15) e fator de crescimento epidermal (EGF) em ovários caprinos através da técnica de RT-PCR em tempo real; 2) avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações destas substâncias sobre a sobrevivência, ativação e crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos cultivados in situ e 3) investigar os efeitos do EGF sozinho ou associado ao hormônio folículo estimulante (FSH) sobre a sobrevivência, formação de antro e crescimento de folículos secundários caprinos isolados, bem como sobre os níveis de RNAm para o EGF e receptor de FSH (FSH-R). Para o cultivo in situ, fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por um ou sete dias em MEM+ adicionado de diferentes concentrações (0, 1, 10, 50, 100 ou 200 ng/mL) de KL, BMP-15 e EGF. Antes e após cultivo, os fragmentos foram fixados e analisados por histologia, microscopia eletrônica de transmissão e/ou de fluorescência, e os folículos foram classificados em primordiais, transição, primários e secundários, bem como em normais ou atrésicos. Além disso, os diâmetros oocitário e folicular também foram avaliados. Com relação ao cultivo de folículos isolados, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por seis dias em α-MEM+ contendo ou não FSH (100 ng/mL) e suplementado ou não com EGF (10 ng/mL). Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para KL, BMP-15 e EGF aumentaram com o desenvolvimento folicular, sendo significativamente superiores em folículos secundários. Além disso, os complexos cumulus-oócito de pequenos e grandes folículos antrais apresentaram maiores níveis de RNAm para BMP-15 e EGF do que as suas respectivas células granulosa/teca, acontecendo o mesmo para o KL somente nos grandes folículos antrais. Após sete dias de cultivo, 50 ng/mL de KL promoveu a manutenção da sobrevivência folicular, o crescimento e a transição para folículos primários. A adição de 100 ng/mL de BMP-15 ao meio manteve a viabilidade, promoveu a ativação e o crescimento in vitro, além do aumento do percentual de folículos secundários. E ainda, a utilização de 1 ou 10 ng/mL de EGF promoveu a sobrevivência e aumentou as taxas de folículos primários, mantendo a integridade ultraestrutural folicular. Já após cultivo dos folículos isolados, observou-se que o EGF sozinho ou associado ao FSH promoveu significativa formação de antro e crescimento folicular. Além disso, FSH, EGF ou ambos reduziram os níveis de RNAm para EGF, enquanto o EGF reduziu os níveis de RNAm para FSH-R. Concluindo, os resultados deste estudo mostraram que os RNAm para KL, BMP-15 e EGF foram detectados em todas as categorias foliculares e tipos celulares investigados. A utilização de KL (50 ng/mL), BMP-15 (100 ng/mL) e EGF (1 ou 10 ng/mL) promoveu a manutenção da sobrevivência folicular, a ativação e o desenvolvimento dos folículos pré-antrais caprinos. Além disso, o EGF e o FSH promoveram o crescimento de folículos secundários caprinos, reduziram os níveis de RNAm para o EGF, e ainda, o EGF diminuiu os níveis de RNAm para FSH-R em folículos secundários caprinos cultivados.

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