Expressão e purificação do domínio Ets do fator de transcrição Spi-C humano recombinante : ensaios de ligação a promotores de linfócitos B
AUTOR(ES)
Ekaterini Gianniotis
DATA DE PUBLICAÇÃO
2008
RESUMO
Os membros da família de fatores de transcrição Ets contêm um domínio de ligação ao DNA, chamado domínio Ets, que reconhece uma seqüência rica em purinas, cujo consenso central é formado pela seqüência 5-GGAA/T-3. O domínio Ets pode ser produzido como um fragmento de proteína que se enovela independentemente, numa estrutura estável, sendo suficiente para que ocorra ligação ao DNA. A proteína Spi-C pertence à subfamília Spi e se caracteriza por ser expressa durante diferentes estágios do desenvolvimento de células B e em macrófagos. Existem alguns trabalhos publicados que descrevem o reconhecimento por Spi-C de algumas seqüências de DNA, previamente estudadas para a proteína PU.1, membro da mesma subfamília. A expressão de Spi-C sobrepõem-se com a de PU.1 ao longo do desenvolvimento das células B. Existem promotores de genes envolvidos no desenvolvimento de células B que contêm sítios para a ligação de proteínas Ets. Estudos quanto à ligação da Spi-C nos mesmos podem contribuir para acrescentar dados sobre a função desse fator de transcrição e sobre a regulação da transcrição desses genes. Neste trabalho, apresentamos a construção do gene, a expressão heteróloga do domínio Ets da proteína Spi-C humana em Escherichia coli e a sua purificação por FPLC com rendimento de aproximadamente 0,7mg de proteína por grama de célula. Com o objetivo de investigar novas seqüências promotoras alvo para Spi-C, foram realizados estudos de ligação a seqüências de DNA localizadas nos promotores dos genes que codificam para a subunidade do receptor de IL-7 e para a proteína transmembrana integrante do complexo receptor de células B, Igα. Estas proteínas participam do desenvolvimento de células B e são essenciais para a seleção das mesmas na medula óssea. Nossos resultados demonstram que o domínio Ets de Spi-C reconhece e se liga a essas seqüências de DNA (migração em gel) formando complexos de diferentes tamanhos. O domínio Ets foi capaz de se ligar a seqüências de DNA in vitro numa proporção maior do que 1:1 sendo que, quanto maior a concentração do domínio maior foi o retardo do DNA no gel. Surpreendentemente, o domínio Ets não foi capaz de discriminar as seqüências selvagens, daquelas com mutações no consenso central de ligação, mantendo o mesmo perfil de retardo das bandas, sugerindo que o restante da proteína é importante para esse reconhecimento
ASSUNTO(S)
proteÍnas biologia celular dna biologia molecular biologia geral
ACESSO AO ARTIGO
http://tede.pucrs.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=1727Documentos Relacionados
- SpiC Is Required for Translocation of Salmonella Pathogenicity Island 2 Effectors and Secretion of Translocon Proteins SseB and SseC
- Expressão e purificação de uma proteína multiepítopo recombinante desenhada a partir de proteínas do vírus da hepatite C
- Expressão e purificação de uma proteína multiepítopo recombinante desenhada a partir de proteínas do vírus da hepatite C
- Purificação e caracterização de uma isoforma c-domínio de enzima conversora de angiotensina do fluido ileal humano.
- Regulação da expressão e ativação do fator de transcrição C-JUN no miocardio de ratos submetido a sobrecarga pressora aguda