Isolation, protoplast culture and regeneration of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) / Isolamento, cultura de protoplastos e regeneração de plantas de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck)
AUTOR(ES)
Lívia Mendes de Castro
DATA DE PUBLICAÇÃO
2010
RESUMO
A regeneração de plantas, por organogênese ou embriogênese somática, a partir do cultivo de células e tecidos vegetais in vitro é a base para a utilização da biotecnologia no melhoramento. Realizaram-se estudos com cinco cultivares de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), Pêra, Natal, Lima Verde, Hamlin e Westin. Este trabalho objetivou a avaliação da eficiência de isolamento de protoplastos das cultivares de laranja doce; o estudo da eficiência de plaqueamento em função de cinco densidades de protoplastos e diferentes meios de cultura e avaliação da embriogênese somática em função da composição dos meios de cultura e concentração da fonte de carboidrato. As soluções enzimáticas testadas para o isolamento de protoplastos foram: 1. Grosser e Chandler (1987), composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R- 10 (Yakult Honsha) e 0,2% de pectoliase Y-23 (Seishin); 2. Grosser e Chandler (1987) modificado, composta de 1% de celulase Onozuka RS (Yakult), 1% macerase R-10 (Yakult Honsha); 3. Solução enzimática composta de 4% de celulase Onozuka R-10 (Yakult), 1% macerase R-10. O plaqueamento dos protoplastos foi realizado em cinco densidades, 2 x 104, 5 x 104; 105; 2x 105 e 3 x 105 protoplastos . mL-1,nos meios de cultura EME 0,7M, BH3 0,7M e BH3 + EME 0,7M em ausência de luz, a 25 ± 1 ºC. A solução enzimática 2 proporcionou um maior rendimento no isolamento de protoplastos das cultivares Hamlin, Natal e Pera e solução enzimática 1 foi melhor para a cultivar Westin. A eficiência final de plaqueamento avaliada aos 90 dias foi superior nas densidades de de 3 x 105 e 2 x 105 protoplastos. mL-1 para as cultivares Hamlin, Natal e Lima Verde, e na densidade de 2 x 105 e 105 protoplastos. mL-1 para a cultivar Westin. A indução da embriogênese somática ocorreu em meio de cultura MT modificado com 500 mg.L-1 de extrato de malte, acrescido de sacarose, galactose, glicose, sorbitol, lactose e maltose, nas concentrações de 18, 37, 75, 110 e 150 mM à temperatura de 27 °C. A formação de embriões somáticos variou com o genótipo, sendo a cultivar Lima Verde e Westin apresentaram menor número de embriões somáticos. As melhores fontes de carboidratos foram a maltose, seguida pela lactose nas concentrações de 37 e 75 mM para a cultivar Pêra, 37 mM para a cultivar Natal e 37, 75 e 110 mM para a cultivar Hamlin.
ASSUNTO(S)
somatic embryogenesis. laranja protoplast plant tissue culture protoplastos. embriogênese somática cultura de tecidos vegetais citrus sinensis
Documentos Relacionados
- In vitro organogenesis in sour orange (Citrus aurantium L.) and genetic transformation of Rangpur lime (Citrus limonia L. Osbeck) and Valencia sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) with the Marafivirus replicase gene
- Development and characterization of polymorphic microsatellite markers for the sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck)
- Sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) genetic transformation with the hrpN gene (harpin) and evaluation for citrus canker (Xanthomonas axonopodis pv. citri) resistance
- Cultura de anteras e partenogênese in situ e in vitro de genótipos de laranja doce (Citrus sinensis Osbeck.)
- Genetic transformation of sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) with the cecropin MB39 gene and evaluation of transgenic plants inoculated with Xylella fastidiosa Wells et al.