Proteinases Larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE). / Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) Larvae Proteinases.

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2007

RESUMO

Neste trabalho foram realizados ensaios de atividade de proteinase em solução e com proteínas imobilizadas em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio copolimerizado com gelatina, para detecção e quantificação das proteinases presentes nos extratos larvares de segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Dermatobia hominis. Nos ensaios quantitativos, utilizou-se um painel de peptídeos sintéticos específicos para as principais classes de proteinases. Verificamos que o substrato pGlu-Phe-Leu p-nitroanilide foi hidrolisado pelo extrato total de L2 (3,0 0,2 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (7,7 0,1 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e que ambas atividades foram parcialmente inibidas pelo trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, 15 % e 3 % respectivamente. Também, demonstramos que o substrato Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester foi hidrolisado pelos extratos totais de L2 (117 24 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (111 10 nmoles hora-1 mg de proteina-1), sugerindo uma predominância da atividade esterásica nestes extratos. A atividade específica de serino-proteinases foi totalmente inibida pelo phenylmethylsulphonyl fluoride nos extratos de L3, enquanto que somente 10 % desta atividade foi inibida nos extrados de L2. Além disso, nós detectamos que o extrato total das larvas L2 (Km = 7,59) tem maior afinidade ao Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester do que o extrato total das larva de L3 (Km = 35,75). Os resultados do ensaio qualitativo com géis de substrato sugerem que os extratos larvares L2 e L3 expressam serino-proteinases com similares (13 kDa e 22 kDa) e distintas (50 kDa em L2 e 30 kDa em L3) massas moleculares relativas. Adicionalmente, isolamos uma atividade esterásica enriquecida do extrato total de L3 utilizando sucessivas cromatografias em colunas de Aprotinina-Agarose e DEAE-Sephacell. Com esta estratégia, detectamos somente uma banda de proteinase de 50 kDa neste extrato total. Estes resultados contribuem para a caracterização das proteinases larvares de D. hominis.

ASSUNTO(S)

serino-proteinases. proteinases medicina veterinaria dermatobia hominis

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