PurificaÃÃo e CaracterizaÃÃo de uma proteÃna de semente de soja (Glycine max L. Merr): AvaliaÃÃo in vitro de atividades antiagregante plaquetÃria e anticoagulante

AUTOR(ES)
DATA DE PUBLICAÇÃO

2008

RESUMO

Uma nova proteÃna de semente de soja (Glycine max), denominada ApcSP (antiplatelet and anticoagulant soybean protein) foi isolada, purificada e caracterizada bioquimicamente. A partir de extratos brutos destas sementes, foi realizado um fracionamento com sulfato de amÃnio, obtendo-se a fraÃÃo F0-60%, com posterior submissÃo à cromatografia de afinidade em coluna de Cramoll 1,4-Sepharose. As proteÃnas adsorvidas eluÃdas com NaCl 1,0 M em tampÃo fosfato de sÃdio 0,1 M, pH 7,0 foram submetidas à cromatografia de fase reversa HPLC. SDS-PAGE na presenÃa de β-mercaptoetanol revelou uma banda polipeptÃdica de 51 kDa. ColoraÃÃo com o reagente de Schiff revelou a natureza glicoprotÃica de ApcSP. A seqÃÃncia do N-terminal obtido pela degradaÃÃo de Edman foi EGQFGPMIQS (10 resÃduos), que apresenta 20% de homologia com a proteÃna albumina 2S tipo 3. O espectro de dicroÃsmo circular foi caracterÃstico de uma proteÃna predominantemente α-hÃlice, e este foi utilizado para estimar as contribuiÃÃes das fraÃÃes de estruturas secundÃrias presentes em ApcSP. DesconvoluÃÃo usando o programa CDPro indicou a presenÃa de 35% de alfa hÃlice, 17% de folhas-beta, 22 % de volta-beta e 26% de desordenada. O espectro de FluorescÃncia de ApcSP revelou uma emissÃo mÃxima em torno de 339 nm. A proteÃna da soja foi excitada em 280 nm e 295 nm, e os espectros de emissÃo foram monitorados na faixa de 290-450 nm e de 305-450 nm. Atividade peroxidÃsica foi detectada utilizando guaiacol e diaminobenzidina como substratos. Biologicamente, houve uma inibiÃÃo da agregaÃÃo plaquetÃria induzida por colÃgeno (100% de amplitude e 98% de slope), trombina (79% de amplitude e 77% de slope) e ADP (62% de amplitude e 58% de slope) na concentraÃÃo de 2 μM de ApcSP em relaÃÃo ao controle. Foi tambÃm avaliado o efeito da proteÃna de soja purificada nos tempos de coagulaÃÃo, afetando as vias extrÃnseca e intrÃnseca da coagulaÃÃo. O tempo de tromboplastina parcialmente ativada (TTPa) foi bloqueado na concentraÃÃo de 3 e 4 μM, apresentando um R (RelaÃÃo do tempo de coagulaÃÃo com o tempo controle de coagulaÃÃo) >7,5. Estes resultados evidenciam que ApcSP com as atividades antiagregaÃÃo plaquetÃria e anticoagulante pode ser de grande importÃncia para a terapia anti-trombÃtica e anticoagulante

ASSUNTO(S)

bioquimica antiaggregant antiagregaÃÃo cramoll 1,4-sepharose glicoproteÃna glycine max glycine max anticoagulaÃÃo glycoprotein cramoll 1,4-sepharose anticoagulant

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