Purificação, caracterização e atividade bioinseticida de um inibidor de tripsina de sementes de Crotalaria pallida

AUTOR(ES)

Carlos Eduardo Maia Gomes

DATA DE PUBLICAÇÃO

2004

RESUMO

Um inibidor de proteinase foi isolado de sementes de Crotalaria pallida por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia de afinidade em Sepharose com tripsina acoplada e precipitação com ácido tricloroacético (TCA). O inibidor de tripsina, denominado ITC, possui massa molecular de 32,5 kDa determinada por SDS-PAGE e é composto por duas subunidades, uma de 25,7 e outra de 5,6 kDa, ligadas por pontes dissulfeto; uma característica típica da família de inibidores de Kunitz. ITC foi estável até 50C e a 100C sua atividade residual foi cerca de 60%. ITC também foi estável em valores de pHs variando de 2 a 12. A inibição da tripsina por ITC é do tipo não-competitivo, com um Ki de 8,8 x 10-7M. ITC inibe fracamente outras proteinases serínicas como quimotripsina e elastase. A inibição da papaína (44%), uma proteinase cisteínica, foi indicativa da bifuncionalidade de ITC. Ensaios in vitro contra proteinases digestivas de vários insetos praga das ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram realizados. ITC inibiu em cerca de 100% enzimas digestivas de Ceratitis capitata (mosca-das-frutas), Spodoptera frugiperda (lagarta do cartucho do algodão), e Alabama argillacea (curuquerê do algodão). ITC também inibiu em 74,4% enzimas digestivas de Callosobruchus maculatus (broca do feijão) uma praga da ordem Coleoptera. ITC, quando adicionado a dietas artificiais, afetou fracamente o desenvolvimento de larvas de C. capitata e teve um WD50 de 2,65% contra larvas de C. maculatus

ASSUNTO(S)

proteínas - bioquímica biossíntese cultura agrícola - nordeste bioquimica atividade biológica - enzimas digestivas inibidores de tripsina - sementes

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