Purificação e caracterização parcial de duas n-acetil-B-hexosaminidases do equinoderma marinho echinometra lucunter

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DATA DE PUBLICAÇÃO

2006

RESUMO

Neste trabalho foram purificadas e caracterizadas parcialmente duas N-acetil-b- hexosaminidases (F11 e F15) extraídas de gônadas do equinoderma marinho Echinometra lucunter. As enzimas foram purificadas com protocolo seqüencial por precipitação com sulfato de amônio e cromatografias de exclusão molecular (Sephacryl S-200, Sephadex G-75 e Sephacryl S-200). A fração F11 foi purificada 192,47 vezes com recuperação de 28,5% e F15 85,41 vezes com recuperação de 32,3%. Suas massas moleculares, determinadas por eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS, foram respectivamente 116 e 42 kDa. Em Sephacryl S-200 F15 apresentou massa molecular de 84 KDa, sugerindo que esta enzima possui forma dimérica. Utilizando-se p-nitrofenil N-acetil-b-glicosaminídeo como substrato obtivemos Km aparente de 0,257 mM e Vmax de 0,704 unidades de absorbância a 405 nm / h para a fração 11, e 0,235 mM e Vmax de 0,9 unidades de absorbância a 405 nm / h para F15. Ambas frações apresentaram pH e a temperatura ótima de catálise 5,0 e 45 C, respectivamente. A atividade N-acetil-b-glicosaminidásica foi potencialmente inibida por prata, iodoacetamida, N-etilmaleimida e PMSF. A forte inibição de F15 por N-etilmaleimida indica o envolvimento de radicais sulfidrila na hidrólise do substrato sintético, caracterizando também ser uma enzima altamente sensitiva a este sal

ASSUNTO(S)

glicosaminoglicanos sulfatados echinometra lucunter sulfatate glycosaminoglycans and gonads bioquimica glicosidases echinometra lucunter gônadas n-acetil-b-glicosaminidases n-acetyl-b-hexosaminidases n-acetil-b-hexosaminidases n-acetyl-b-glicosaminidases

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