Purification and properties of asparaginase from the testa of immature seeds of pea (Pisum sativum L.)
AUTOR(ES)
Chagas, Eliana P., Sodek, Ladaslav
FONTE
Brazilian Archives of Biology and Technology
DATA DE PUBLICAÇÃO
2001-09
RESUMO
Uma asparaginase dependente do K+ (E.C. 3.5.1.1.) foi purificada 1328 vezes a partir de testas de sementes imaturas de ervilha (Pisum sativum L., var. Bolero) e caracterizada. Anticorpos obtidos a partir da asparaginase purificada, usados como sonda em ensaios tipo "Western blot", reagiram com a banda da asparaginase de extratos semi-purificados. Entretanto, em ensaios realizados com extratos brutos de testas de ervilha, uma reação foi obtida com pelo menos 4 proteínas, entre elas a da asparaginase. O uso de anticorpos purificados por afinidade pelas 4 bandas mais evidentes do extrato bruto demonstraram um alto grau de especificidade para com as bandas de proteína das quais foram purificadas, indicando uma mistura de anticorpos específicos. A posição de eluição da atividade de asparaginase em Sephacryl S-200, bem como a sua mobilidade em PAGE não-denaturante relativo à BSA, sugere uma proteína de Mr 69.000. Em análise realizada por SDS-PAGE não foi obtida nenhuma evidência para a dissociação da proteína em subunidades, sugerindo que a proteína seja monomérica com Mr 69.000. Outras propriedades incluem um Km apparente de 2,4 mM, pI entre 4,5 e 5, e inibição competitiva pelo aspartato e pela glicina.
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