Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para detecção dos genes gag e pol do Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) / Reaction in Chain of Polymerase (PCR) for detention of the genes gag and pol of the Immunodeficiency Virus, Feline (FIV)
AUTOR(ES)
Sheila de Oliveira Medeiros
DATA DE PUBLICAÇÃO
2006
RESUMO
O presente estudo teve como objetivo principal padronizar a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) para detecção do genoma proviral do vírus da imunodeficiência felina (FIV), um retrovirus associado com a síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) dos felinos. Avaliamos amostras de sangue de 97 felinos domésticos provenientes da cidade do Rio de Janeiro. Deste total, 60 felinos eram sororeativos para anti-FIV e trinta e sete felinos negativos, que foram avaliados como grupo controle. O status imunológico destes felinos foi avaliado através do ensaio munoenzimático (Kit FIV/FeLV SNAP COMBO). Entre as amostras sororeativas, 40 (67%) apresentavam alterações clínicas, sendo que 38 foram classificados na fase de complexo relacionado à AIDS (CRA) e 2 na fase AIDS. Para a extração de DNA utilizou-se QIAmp Blood Mini Kit (QIAGEN). Após a extração, as amostras foram submetidas a PCR para DNA mitocondrial do gene 16s como controle positivo de extração. Para a detecção do genoma proviral do FIV foram selecionados iniciadores que amplificam uma região com 483 pb do gene gag e 471 pb do gene pol. Para a nested PCR foram selecionados iniciadores que amplificam uma região interna com 203 pb do gene gag e 183 pb do gene pol. A especificidade dos iniciadores foi avaliada utilizando amostras de animais sororeativos para o vírus da leucemia felina (FeLV), um retrovirus heterólogo. Quatro protocolos distintos foram avaliados para a região gag e três para a região pol, buscando obter o melhor método para amplificação. Das amostras sororeativas, 39 (65%) apresentaram resultado de amplificação para a região gag utilizando os quatro protocolos, e 6 (10%) para a região pol, utilizando três protocolos. Entre as amostras soronegativas, um felino apresentou resultado de amplificação para a região gag. Em uma segunda coleta este felino demonstrou conversão sorológica. O seqüenciamento genômico permitiu avaliar a especificidade dos fragmentos amplificados em oito amostras, entretanto não foram obtidos resultados conclusivos em relação aos subtipos virais. Os protocolos selecionados para cada região apresentaram resultados estatisticamente significativos somente para a região gag. A reação de nested PCR demonstrou ser uma técnica viável para o estudo do FIV, amplificando o DNA proviral no sangue dos felinos com reatividade para anti-FIV de forma eficiente. A aplicação desta metodologia associa-se a situações específicas em que não seja possível detectar anticorpos induzidos pelo vírus, como um método alternativo para o diagnóstico confirmatório e para detecção precoce da infecção.
ASSUNTO(S)
reação em cadeia da polimerase syndrome the immunodeficiency virus, feline síndrome de imunodeficiência adquirida felina biologia molecular reaction in chain of polymerase
ACESSO AO ARTIGO
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