Replicação de um baculovírus recombinante contendo o gene rolA de Agrobacterium rhizogenes em cultura de células de inseto.

AUTOR(ES)

FERREIRA, B. C.

FONTE

Brasília: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia

DATA DE PUBLICAÇÃO

2011

RESUMO

As características morfológicas conferidas a plantas infectadas por Agrobacterium rhizogenes têm como principal responsável o gene rolA. Entre as anomalias causadas por esse gene estão a redução do tamanho da planta, inibição do crescimento da raiz e retardo na floração. Em trabalhos anteriores foi construído um baculovírus recombinante com o gene rolA no locus do gene da poliedrina. O gene rolA foi clonado no vetor pFastBac HTb usado para transformação em células DH10Bac cells (Invitrogen), que contêm o genoma viral de Autographa californica Nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Este DNA viral recombinante foi cotransfectado em células de inseto Sf9 resultando em um vírus deficiente na produção da poliedrina, o qual foi chamado de v-rolA (Sihler et al, 2002). No presente trabalho foi investigada a infecção do vírus v-rolA nas diferentes linhagens celulares de Trichoplusia ni (Tn5B1-4) e de Spodoptera frugiperda, IPLB-SF-21AE e Sf9. O inóculo viral foi removido depois de uma hora de adsorção e as células foram incubadas em meio TNMFH a 27°C por 48h. O progresso de infecção foi monitorado por microscopia óptica. Alterações morfológicas como hipertrofia nuclear e formação de corpo denso foram observados nas células Tn5B1-4, SF21 e Sf9 após 24h. O DNA do vírus recombinante foi extraído de células infectadas, digeridas com enzima Pst I e amplificado através da técnica de PCR. As amostras de DNA foram analisadas por eletroforese em gel de agarose mostrando que o vírus se replicou em todas as linhagens celulares.

ASSUNTO(S)

baculovírus recombinante - replicação gene rola agrobacterium rhizogenes células - inseto- cultura

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