Transient gene expression of beta-glucuronidase in citrus thin epicotyl transversal sections using particle bombardment
AUTOR(ES)
Bespalhok Filho, João C., Kobayashi, Adilson K., Pereira, Luiz F. P., Galvão, Rafaelo M., Vieira, Luiz G. E.
FONTE
Brazilian Archives of Biology and Technology
DATA DE PUBLICAÇÃO
2003-01
RESUMO
Nosso objetivo é desenvolver um protocolo para transformação genética de Citrus através do bombardeamento de partículas usando cortes finos de epicótilo como explantes alvo. Neste trabalho foram otimizadas condições para a expressão transiente usando citrange carrizo (Citrus sinensis x Poncirus trifoliata) como modelo. Epicótilos de plântulas de citrange carrizo germinadas in vitro foram cortadas transversalmente em seções de 1 mm e cultivadas em meio MS com 5 miM no escuro. Depois de uma semana, explantes foram bombardeados com o plasmídio pE2113-GUS usando um aparelho de alta pressão de hélio (PDS 1000/He Bio-Rad). As melhores condições para a expressão transiente foram: partículas de tungstênio M-25, pressão de hélio de 1550 psi, distância de 9 cm entre os explantes e DNA/particle holder e cultivo dos explantes em meio com alta osmolaridade (0,2 M manitol + 0,2 M sorbitol) 4 h antes e 20 h depois do bombardeamento. Usando estes parâmetros, uma média de 102 pontos azuis por bombardeamento (20 explantes/placa) foi obtida. Este protocolo esta sendo usado atualmente para transformação de citrange Carrizo e adaptado para transformação de laranja doce (Citrus sinensis).
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